اما روش‌های بیولوژیکی یکی از مطمئن‌ترین راه‌ها برای بررسی صحت اتوکلاو است. این تست یک بار در هفته برای بررسی دستگاه استفاده می‌شود. در این روش از میکروارگانیسم‌های زنده مانند هاگ که در محلول و در بسته بندی آمپول هستند به عنوان نشانگر بکار می‌رود. هاگ‌ها یا به عبارتی دیگر اسپورها یکی از مقاوم‌ترین میکروارگانیسم‌های موجود هستند. وقتی هاگ‌ها به طور کامل حذف شدند، می‌توانید مطمئن باشید که دستگاه به خوبی کار می‌کند. میکروارگانیسم‌ها بسیار شبیه به شاخص‌های شیمیایی هستند. نمونه‌ای از اسپور مورد استفاده برای آزمایش اتوکلاو بیولوژیکی Geobacillus stearothermophilus است. اسپورهای آتروفی باسیلوس نیز برای کنترل گرمای خشک و اکسید اتیلن استفاده می‌شوند.

بررسی دستگاه استریل کننده دندان با استفاده از اسپور یکی از دقیق‌ترین بررسی‌های دوره‌ای است که می‌توان انجام داد. نحوه استفاده از هاگ در آزمایش بیولوژیکی به شرح زیر است:

• ابتدا یک آمپول حاوی هاگ وارد دستگاه می‌شود. آمپول دیگری به عنوان کنترل در خارج از دستگاه قرار میگیرد تا پس از استریل کردن با یکدیگر مقایسه شوند.
• عملیات استریلیزاسیون را با پارامترهای صحیح شروع کنید و منتظر بمانید.
• پس از عمل ویال، آمپول را از دستگاه خارج کنید.
• آمپول‌های آزمایش شده و کنترل شده را بشکنید تا آنزیم آزاد شود.
• اکنون باید هر دو آمپول را در نشانگر قرار دهید.